轉染技術是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術,它是研究基因表達調控,突變分析等的常規工具。隨著功能研究的興起,其應用越來越廣泛。
LeapWal PolyShooter 蛋白轉染試劑 P19103可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-96小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。
LeapWal PolyShooter 蛋白轉染試劑 P19103在使用前需要加血清。胎牛血清(FCS)經常用到,便宜一點的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質量的變化直接影響轉染效率。
因此在轉染前建議先測(轉右),試出對細胞生長良好的血清批號,轉染時用同一批號的血清,并同時做負對照(不加轉染試劑及外源DNA)以測試細胞生長是否正常。有些轉染技術如脂質體轉染在有血清存在情況下效率很低,因此在轉染前要除血清。但有些對此敏感的細胞如原代細胞會受到損傷,甚至死亡導致轉染效率低。